ESCUELA DE DOCTORADO

 
Tesis Doctorales de la Universidad de Alcalá
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DESARROLLO DE SISTEMAS DE DETECCIÓN DE LEISHMANIA BASADOS EN APTÁMEROS
Autor/aFrezza , Valerio
DepartamentoBiología de Sistemas
Director/aGonzález Muñoz, Víctor Manuel
Codirector/aGarcía Sacristán, Ana
Fecha de defensa16/07/2021
CalificaciónSobresaliente Cum Laude
ProgramaSeñalización Celular (RD 99/2011)
Mención internacionalNo
ResumenMétodos: Partiendo de una población de aptámeros de ssDNA obtenida previamente contra la proteína histona H3 de Leishmania infantum (LiH3), identificamos dos aptámeros individuales, AptLiH3#4 y AptLiH3#10. A continuación, realizamos ensayos ELONA, western blot y slot blot para establecer la especificidad y afinidad de los aptámeros por la histona LiH3. También, realizamos ensayos ELONA utilizando péptidos correspondientes a secuencias superpuestas de LiH3 para mapear la interacción aptámero:LiH3. Además, desarrollamos diferentes sistemas de detección basados en ELONA utilizando los aptámeros como moléculas de reconocimiento y detección para determinar cuál es el que muestra una mayor sensibilidad. Resultados: Ambos aptámeros tienen alta afinidad y especificidad por LiH3 endógena en lisados de promastigotes. De los diferentes sistemas ensayados, hemos confirmado que el ELONA acoplado a PCR a tiempo real (ELONA-qPCR) es el más sensible, alcanzándose un límite de detección de 600 parásitos. Conclusiones: Los aptámeros identificados podrían ser utilizados como moléculas de bioreconocimiento de la histona LiH3, pero es necesario optimizar el sistema de detección para su uso en el diagnóstico de la leishmaniasis.