ESCUELA DE DOCTORADO

 
Tesis Doctorales de la Universidad de Alcalá
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APLICACIÓN DE LA TECNOLOGÍA MICROARRAY AL DIAGNÓSTICO DE LA ALERGIA A LOS ALIMENTOS
Autor/aSanchez Ruano, Laura
DepartamentoBiología de Sistemas
Director/aMartínez-botas Mateo, Javier
Codirector/aHoz Caballer, María Belén de la
Fecha de defensa21/12/2020
CalificaciónSobresaliente Cum Laude
ProgramaCiencias de la Salud (RD 99/2011)
Mención internacionalNo
ResumenLas alergias a los alimentos constituyen un importante problema de salud que actualmente afecta a un elevado porcentaje de la población. Existen diversas pruebas que son útiles en el diagnóstico de las alergias mediadas por IgE, aunque es preciso incorporar nuevas técnicas. Los microarrays de péptidos podrían constituir un método eficaz de apoyo al diagnóstico y pronóstico de las alergias a los alimentos. OBJETIVO El objetivo de este trabajo es analizar los patrones de reconocimiento inmunológico mediante la tecnología microarray de péptidos en pacientes alérgicos a las proteínas de la leche (COALE), huevo (OVALE), cacahuete y melocotón (LTP) y su utilidad diagnóstica y pronóstica. MÉTODOS Los estudios COALE y OVALE fueron de tipo longitudinal, mientras que el estudio LTP fue transversal. En todos se recogió información clínica relevante y se confirmó la alergia mediante pruebas diagnósticas. Con el suero de los pacientes se llevó a cabo el ensayo de microarrays de péptidos, constituidos por 20 aa solapantes (3-offset) e impresos sobre cristales, correspondientes a las proteínas estudiadas. Se emplearon herramientas bioestadísticas y bioinformáticas para el análisis de los datos. RESULTADOS En el estudio COALE (118 pacientes) no se obtuvieron diferencias significativas a nivel basal y sí se observaron en las visitas 2 y 3, una intensidad media de reconocimiento y un número de péptidos de IgE, superior en alérgicos frente a tolerantes. De los péptidos significativos se seleccionaron 10 péptidos en la visita 3 mediante análisis ROC: 4 de ¿s1-cas (¿s1-casp1, ¿s1-casp16, ¿s1-casp17 y ¿s1-casp18), 4 de ß-lac (ß-lacp5, ß-lacp6, ß-lacp7 y ß-lacp38) y 2 de ¿-cas (¿-casp30 y ¿-casp31). Además, los péptidos ¿s1-casp16 y ¿-casp30 fueron seleccionados mediante un árbol de decisión. En el estudio OVALE (42 pacientes) no se obtuvieron diferencias significativas en intensidad media de reconocimiento ni en el número de péptidos a nivel general. Sí se obtuvieron 10 péptidos significativos en la visita 3 también seleccionados mediante análisis ROC: 25-27, 73-75, 91-92 y 118-119 de la OVA. Los péptidos 74 y 75 de OVA fueron seleccionados además en un árbol de decisión. El reconocimiento de IgG4 no mostró un valor predictivo de la tolerancia. El estudio LTP (48 pacientes) mostró niveles superiores de IgE, así como significativamente superiores en IgG4 frente al péptido 4 de Ara h 9, en alérgicos frente a tolerantes, lo que podría explicar en parte la tolerancia de estos pacientes mediante la actividad bloqueante de los epítopos de IgE. CONCLUSIONES Mediante microarrays de péptidos se han logrado establecer diferencias en el perfil de reconocimiento de IgE entre pacientes alérgicos y tolerantes, y se ha obtenido un grupo de péptidos biomarcadores, con buen rendimiento diagnóstico, en los estudios COALE y OVALE. En el estudio LTP, se han observado diferencias en el perfil de reconocimiento de IgE e IgG4 entre alérgicos y tolerantes a cacahuete en las proteínas estudiadas. El péptido 4 de Ara h 9 podría presentar un valor predictivo de tolerancia en alergia a cacahuete. Los microarrays de péptidos podrían ser de gran utilidad en el manejo diagnóstico de las alergias estudiadas.